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豬藍耳病抗體監測及其規律的應用

瀏覽次數: 日期:2018-04-03
摘  要

總結發病豬場藍耳病病毒抗體變化規律,是監測和防控藍耳病的重要基礎。本研究跟蹤監測了新鄉某規?;i場藍耳病發病前驅期、明顯期及轉歸期的藍耳病病毒抗體S/P值,對S/P值檢測結果、發病前期的抗原水平檢測結果和豬場的生產成績進行了綜合分析。結果顯示,隨著藍耳病病毒抗體S/P值的升高,母豬的分娩率和保育豬的成活率開始下降,尤其是當S/P值高于2.5的母豬群體比例高于15%時,母豬分娩率和保育豬成活率明顯下降; 96.2%的母豬群藍耳病病毒抗體S/P值介于0.4~2.0時,且離散度低于45%時,豬群藍耳病處于陽性穩定狀態。

關鍵詞:藍耳??;抗體監測;S/P值

日常監測是預防和控制流行性疫病的重要基礎[1],是養殖戶評估免疫程序合理性、選擇疫苗種類、掌握豬群健康狀態的重要手段。檢測數據可從側面反映豬場的管理水平高低。藍耳?。≒RRS)實驗室檢測方法主要包括抗原檢測和抗體檢測??乖瓩z測包括聚合酶鏈式反應(PCR)和實時熒光定量PCR(Real-time PCR);抗體檢測包括免疫熒光試驗(IFA)、免疫過氧化物酶單層分析法(IPMA)、中和試驗(SVN)和酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。

由于藍耳病病毒(PRRSV)核衣殼蛋白(N蛋白)不能誘導產生病毒中和抗體,以N蛋白作為主要包被抗原的PRRSV抗體間接ELISA方法檢測結果,并不能反映機體的免疫狀態,故其不適合用于對疫苗免疫效果的評價[2]。盡管N蛋白抗體ELISA檢測結果不能真實反映豬的保護力,但是根據PRRS ELISA抗體S/P值的離散度結合多次抗體檢測,足以準確判斷豬群藍耳病的感染狀態及變化趨勢[3]。與其他檢測方法相比,ELISA檢測方法具有操作簡便、易于標準化、快速敏感等優點,非常適合大規模流行病學調查和疫病監測。

ELISA抗體檢測試劑盒作為市場上最早應用的商品化檢測工具,是監測PRRS的重要手段。目前,使用ELISA抗體檢測法追蹤并系統研究發病豬群在前驅期、明顯期及轉歸期等不同疾病發展階段PRRS抗體S/P值變化規律的文獻較少。為更全面揭示實際生產中PRRS的抗體變化規律,本研究跟蹤監測了某規?;i場藍耳病發病前驅期、明顯期及轉歸期的抗體S/P值。結合以上數據,筆者針對PRRS S/P值的變化規律與豬場生產成績的關系進行了探討研究,期望能夠為我國PRRS的監測和防控提供基礎數據和科學依據。

1
材料與方法
1.1
  血樣采集及處理

試驗地點:新鄉德豐養殖場,存欄600頭母豬。采血時間:分別于豬群發病的前驅期(2016年10月)、明顯期(2016年11月)和轉歸期(2017年3月)隨機選擇母豬并逐頭采集前腔靜脈血5 mL,待全血凝固析出血清后,4000 r/min離心10 min,取血清置于1.5 mL EP管,4℃環境存放備用。

1.2
  ELISA抗體檢測

RT-PCR法檢測PRRS發病初期母豬血清抗原,NSP2基因引物[4] F:5’-TGGGCGACAATGTCCCTAAC-3’,R:5’-GCTGAGTATTTTGGGCGTGTG-3’,由生工生物工程(上海)股份有限公司合成。PRRS抗體檢測使用進口IDEXX試劑盒。PRRS抗體的有無(陽性/陰性)根據樣品的S/P值判定。如果S/P值<0.4,樣品應判定為PRRS 抗體陰性;如果S/P值≥0.4,樣品應判定為PRRS抗體陽性。

2
   結果與分析
2.1
  豬場首次血清PRRS抗原檢測結果

用RT-PCR的方法擴增NSP2基因,目的基因片段涵蓋變異株的基因缺失片段,用于區分經典株和變異株[5]。經典株擴增基因片段508 bp,變異株擴增基因片段418 bp。RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳顯示,24份血樣中(共25份血樣,1份數據丟失)共檢測出7份抗原陽性,陽性率29.2%,說明母豬群存在PRRSV野毒感染,且豬群中存在經典株和變異株(見圖1),存在病毒血癥的豬群中,變異毒株所占比重較大(占87.5%)。該豬群免疫過經典株疫苗,未免疫過高致病株疫苗,表明本次發病由PRRSV變異株引起,可能與豬場8月份引進的150頭后備母豬有關。

zhu1.png圖1  RT-PCR瓊脂糖凝膠電泳結果

:1為DL 1000 Marker;2~25為檢測樣品。

2.2
  豬場連續3次血清PRRS抗體監測結果

首次抗體檢測結果:母豬采樣25頭,S/P值介于0.29~3.22;第二次抗體檢測結果:母豬采樣16頭,S/P值介于0.18~4.01;第三次抗體檢測結果:母豬采樣28頭,S/P值介于0.45~2.39。從母豬群抗體檢測結果可以明顯看出,豬群發病前驅期,明顯期和轉歸期PRRS抗體S/P值先升高再下降;其中豬場PRRS穩定以后,抗體S/P值低于2.5(見圖2)

zhu2.png

圖2  母豬連續3次PRRS抗體檢測結果

2.3
  豬場連續3次血清PRRS抗體S/P值分布

IDEXX PRRS抗體檢測S/P<0.4,PRRS為陰性;S/P≥0.4,PRRS為陽性;當豬群S/P≥2.5的比例大于5%,離散度大于40%時,豬群藍耳病風險較高??贵w檢測結果數值分布顯示(見表1),發病初期S/P值平均值為1.40,離散度為63.08%,S/P值≥2.5的比例為16%;發病高峰期S/P值平均值為1.91,離散度為63%,S/P值≥2.5的比例為31.25%;康復期S/P值平均值為0.84,離散度為45.82%,S/P值≥2.5的比例為0。由3次抗體檢測S/P值的分布可知,發病初期和高峰期PRRS S/P平均值會逐漸增大,且離散度較高;當96.1%的母豬群PRRS抗體S/P值介于0.4~2.0時,豬群恢復正常。

表1  母豬連續3次抗體水平檢測結果分析

zhu3.jpg

2.4
  豬場生產情況

從2015年10月份到2016年2月份,豬場育肥豬群相對穩定(月死淘率在0.7%以內),母豬群和保育豬群一直很不穩定。如表2所示,母豬分娩率從2015年10月份到2016年1月份一直低于豬場的正常生產水平,2月份以后分娩率指標恢復正常;保育豬從2015年10月份到2016年1月份死淘率居高不下,一直遭受副豬嗜血桿菌和腦炎性鏈球菌的困擾,嚴重時仔豬在哺乳期間就出現整窩發熱、喘氣的現象,直至3月份以后生產恢復正常。

表2  豬場2015年10月至2016年3月分娩率和保育成活率

zhu4.jpg

3
 討論 
3.1
  PRRSV ELISA抗體消長規律

由于豬場之間是否免疫PRRS疫苗及接種疫苗毒株情況不一,且PRRSV ELISA檢測的抗體是非保護性中和抗體,故在通過抗體檢測數據判斷豬場PRRS感染狀態時,不能僅僅依靠單次檢測結果[6](并非S/P值越高越穩定),而要結合抗體檢測結果、豬場的疫苗免疫情況和各階段豬群的生產情況。判斷一個豬場PRRS的變化趨勢,需要定期監測抗體,并綜合分析。

通過發病前驅期、明顯期、轉歸期3次抗體S/P值的變化可知,在豬場PRRS由穩定到不穩定的過程中,抗體S/P平均值會逐漸增大,且抗體離散度較大[7];而在豬場PRRS由不穩定到穩定的過程中,抗體S/P平均值會逐漸變小,且抗體離散度較小。結合豬場的實際生產情況,當絕大多數(96.2%)豬群S/P值介于0.4~2.0時,且離散度低于45%時,母豬分娩率達到85%以上,保育豬成活率達到96%以上,豬群藍耳病處于陽性穩定狀態。

3.2
  PRRS抗體監測及其規律的應用

在中國普遍“藍”的大環境下[8-10],中小規模養殖場應該努力做到PRRS陽性穩定狀態。定期檢測各階段豬群的PRRS抗體,有助于掌握PRRS在各階段豬群的循環情況,監控整個豬場PRRS的變化趨勢,便于及時做出決策(淘汰、藥物控制或者疫苗免疫)。及時淘汰S/P值高于2.5且生產成績很差的母豬及8胎以上的母豬,保持合理的種豬胎次結構;在引進后備種豬時,了解后備豬群的PRRS感染狀態,做好疫苗馴化或者淘汰母豬馴化[11],有助于種豬群維持PRRS陽性穩定狀態。對于保育和育肥豬群PRRS階段性發病問題,可以在豬群發病前1個月做經典株弱毒苗的免疫,有利于維持豬群PRRS陽性穩定,減少損失;對于PRRS陽性豬群,減少應激,定期投喂大環內酯類抗生素[12-14],有助于維持豬群良好的生產狀態。

參考文獻

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[2] Nelson EA, Christopher-Hennings J, Benfield DA. Serum immune responses to the proteins of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus[J]. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 1994, 6(4):410-415.

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[12] 曲向陽, 李喜煥, 姚火春. 替米考星防控藍耳病及相關細菌性肺炎的研究進展[J]. 養豬, 2012(2):84-87.

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[14] 朱利俊, 張錦國, 田繼承, 等. 替米考星對初產母豬藍耳病的效果觀察[J]. 畜牧獸醫科學(電子版), 2017(9):4-5.


本文已刊登于《中國豬業》雜志第141期。


 

所屬類別: 臨床應用

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